各1滴)。每次檢測(cè)時(shí)至少每5塊微滴板中應(yīng)有一組上述三種對(duì)照試驗(yàn)。
B3.3.2.7 往各孔滴完靶菌菌液之后，應(yīng)將該菌液兩滴分別滴加到一個(gè)巧克力色瓊脂平皿的一端，沿著劃好的兩條線(xiàn)傾斜下流，于37℃燭缸內(nèi)同時(shí)培養(yǎng)，次日檢查每滴靶菌的菌落數(shù)及其純度。
B3.3.2.8 判斷結(jié)果時(shí)，先檢查上述三種對(duì)照試驗(yàn)的結(jié)果：補(bǔ)體的和細(xì)菌生長(zhǎng)對(duì)照的各孔應(yīng)出現(xiàn)眾多的紅色點(diǎn)狀小菌落；陽(yáng)性參考血清應(yīng)達(dá)到原來(lái)確定的殺菌滴度。若所試各孔中紅色點(diǎn)狀菌落數(shù)目明顯地少于補(bǔ)體對(duì)照孔或不出現(xiàn)紅色點(diǎn)狀菌落時(shí)，則判斷為殺菌陽(yáng)性；如果所試孔中的菌落數(shù)目接近補(bǔ)體對(duì)照孔的一半或更多時(shí)，則判斷為殺菌陰性。
B3.3.2.9 根據(jù)紅色點(diǎn)狀菌落數(shù)目的多少，以符號(hào)"＋"記錄試驗(yàn)結(jié)果。若補(bǔ)體及靶菌生長(zhǎng)對(duì)照各孔的細(xì)菌正常生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)出現(xiàn)眾多紅色點(diǎn)狀菌落，可記為"＋＋＋＋"。當(dāng)所試各孔與其比較，菌落數(shù)減少30％以下，記為"＋＋＋"；減少50％左右記為"＋＋"；減少70％左右記為"＋"；每孔少于10個(gè)菌落則記為"±"。以細(xì)菌生長(zhǎng)成呈"＋"及以下者判斷為殺菌陽(yáng)性；以"＋＋"及以上者判為殺菌陰性。以出現(xiàn)殺菌陽(yáng)性的血清最高稀釋度為殺菌抗體的最高滴度。
附錄C
(提示的附錄)
膠乳凝集試驗(yàn)
C1 目的
應(yīng)用膠乳凝集試驗(yàn)測(cè)定病人CSF、急性期血清和尿中Nm群特異抗原，輔助流腦臨床診斷。
C2 材料
C2.1 10％膠乳顆粒(Latex Partic1es，Lx)懸液，顆粒直徑為0.81μm。
C2.2 從兔免疫血清中提純的抗A、B和C群Nm的IgG。
C2.3 在潔凈玻璃板上，用紅漆畫(huà)兩排紅圈，其直徑為3.5cm左右，漆干后備用。
C2.4 pH8.2，0.1mol/L硼酸鹽緩沖液。
C2.5 BSA。
C2.6 白明膠。
C2.7 戊二醛。
C2.8 疊氮鈉。
C2.9 懷疑流腦病人的CSF或急性期血清或尿液。
C3 試驗(yàn)方法
C3.1 兔抗不同群Nm的IgG致敏Lx。
C3.1.1 將10％Lx懸液用硼酸緩沖液再稀釋80倍。
C3.1.2 取稀釋的Lx懸液1個(gè)體積分別加等體積合適濃度的兔抗不同群Nm的IgG，置25mL容量的三角瓶中。
C3.1.3 在37℃水浴中旋轉(zhuǎn)(120r/min)振蕩瓶中的反應(yīng)物，致敏Lx2h。必要時(shí)可在每毫升Lx中加25％戊二醛10～20μL，這將有助于Lx吸附IgG。
C3.1.4 離心致敏過(guò)的Lx(3000r/min，30min)，用1mL吸管小心吸取上清液，計(jì)量后棄之；再加含有0.1％BSA的硼酸鹽緩沖液(Borate－Buffered Solution Containing BSA，BBSB)，混懸Lx，同上離心，棄上清，除去游離的IgG；照此重復(fù)洗滌Lx3次。
C3.1.5 用BBSB液再將Lx恢復(fù)到致敏時(shí)的濃度，加疊氮鈉至終濃度為0.1％，置4℃?zhèn)溆?～6個(gè)月。
C3.1.6 用正常兔IgG同上步驟致敏Ix作為陰性對(duì)照。
C3.2 以膠乳凝集試驗(yàn)檢測(cè)疑似流腦病人標(biāo)本內(nèi)Nm群特異性抗原。
C3.2.1 病人標(biāo)本的處理：CSF離心(3000r/min，30min)，取上清，沉淀部分作細(xì)菌培養(yǎng)；急性期血液(2mL)，分離血清，置56℃將其滅活30min；急性期尿液5mL加20mL無(wú)水乙醇，置4℃1～2h，離心(3000r/min，15min)，棄上清，收集沉淀部分加0.25mL BBSB液將其溶解，同前離心，小心地吸取上清液待測(cè)，不要吸取尿中不溶解的沉渣。
C3.2.2 用BBSB液將處理過(guò)的標(biāo)本從1：2起連續(xù)倍比稀釋成不同的稀釋度。
C3.2.3 用9號(hào)針頭分別吸取各稀釋度標(biāo)本2滴滴到玻璃板上的紅圈內(nèi)，其中1滴滴到上列一排的紅圈內(nèi)，作為試驗(yàn)組；另1滴滴到下列一排的紅圈內(nèi)，作為平行對(duì)照組。
C3.2.4 往試驗(yàn)組的紅圈內(nèi)各加1滴免疫的兔IgG致敏過(guò)的Lx懸液；往對(duì)照組的紅圈內(nèi)各加1滴正常兔IgG所致敏的Lx懸液。
C3.2.5 輕輕地旋搖玻板，使標(biāo)本與Lx充分混勻。
C3.2.6 在1～2min內(nèi)即可見(jiàn)凝集，5