min時(shí)凝集更明顯，此時(shí)可記錄試驗(yàn)結(jié)果。
C3.2.7 若只在試驗(yàn)組的紅圈內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集，但Lx本身與BBSB液以及在平行對照組的紅圈內(nèi)皆不出現(xiàn)凝集則判斷為陽性反應(yīng)。此時(shí)與陰性對照組比較，Lx懸液變得較清亮，Lx明顯地聚集成較大的顆粒。
C3.2.8 在上述病人標(biāo)本中只要有一種標(biāo)本與抗任何一群Nm的IgG所致敏的Lx發(fā)生明顯凝集反應(yīng)，則說明所檢標(biāo)本中含有Nm相應(yīng)群特異的抗原，即可輔助臨床診斷為流腦。
附錄D
(提示的附錄)
以PCR檢測病人急性期血清或CSF中Nm的DNA特異片段
D1 目的
應(yīng)用PCR檢查病人急性期血清或CSF中Nm的DNA特異片段，對流腦病人進(jìn)行早期診斷。
D2 材料
D2.1 疑似流腦患者的CSF或急性期血清。
D2.2 Nm的模板DNA和正常人血清作為對照。
D2.3 4×dNTP。
D2.4 瓊脂糖。
D2.5 溴化乙啶。
D2.6 Taq酶(Promega)。
D2.7 引物1為：5＇-ATTATTCAGACCGCCGGCAG-3′；
引物2為：5＇-CCGATAATCAGGCATCCG-3′。
D2.8 液體石蠟。
D2.9 無菌去離子水。
D2.10 紫外光檢測器。
D2.11 PCR擴(kuò)增儀。
D2.12 10×PCR反應(yīng)緩沖液［500mmol/L KCl，100mmol/L Tris－HCl，(室溫，pH8.3)，15mmol/LMgCl2，0.1％(W/V)］明膠。
D2.13 載樣緩沖液(0.2％溴酚藍(lán)，50％蔗糖)。
D2.14 1×TBE電泳緩沖液：
0.089m ol/L Tris－H3BO3
0.002mol/L EDTA
D2.15 電泳儀。
D2.16 分子量標(biāo)準(zhǔn)：λDNA－EcoR I/HindⅢ。
D3 擴(kuò)增程序
在0.5mL Eppendorf管中分別加入：
反應(yīng)物 加樣順序 體積(μL) 終濃度
10×緩沖液 1 5.0 1×緩沖液
4×dNTP混合物 2 4.0 200μmol/L 每種
dNTP
引物1 3 2.5 1μmol/L
引物2 4 2.5 1μmol/L
模板DNA或待檢標(biāo)本 5 5.0 5.0ng DNA/μL
(標(biāo)本需95℃加熱5min預(yù)處理)
無菌去離子水 6 30.5
(95℃水浴10min，快速離心30s)
TaqDNA聚合酶 7 0.5 1u
液體石蠟 8 25.0
D3.1 混勻離心，于72℃反應(yīng)2min后即開始循環(huán)。循環(huán)參數(shù)如下：
94℃變性反應(yīng)30s；
56℃退火反應(yīng)30s；
72℃延伸反應(yīng)60s。
D3.2 30個(gè)循環(huán)后再72℃延伸4min。
D3.3 反應(yīng)結(jié)束，取出反應(yīng)管冷至室溫后置4℃供檢測。
D4 擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測
D4.1 取2μL反應(yīng)產(chǎn)物與1μL載樣緩沖液混合。
D4.2 用含溴化乙啶(0.5μg/mL)的1.2％瓊脂糖凝膠檢測擴(kuò)增產(chǎn)物。
D4.3 75mm×48mm微型膠，以6V/cm電泳1h，電泳緩沖液為1×TBE。
D4.4 電泳結(jié)束后，將凝膠置紫外光檢測器上觀察結(jié)果、照相。
D4.5 擴(kuò)增產(chǎn)物特異片段的長度為596個(gè)堿基對。
附錄E
(提示的附錄)
流行性腦脊髓膜炎治療原則
E1 普通型
E1.1 一般治療 臥床休息，流質(zhì)飲食，必要時(shí)鼻飼或靜脈補(bǔ)液。
E1.2 對癥治療 高熱、頭痛、嘔吐、煩躁或驚厥等，應(yīng)分別給予相應(yīng)處理。
E1.3 病原治療 輕癥病例首選SD，疑對磺胺過敏或耐藥者應(yīng)改換其他藥物如青霉素或氯霉素。
E1.3.1 磺胺嘧啶(SD)：成人6～8g/d，小兒0.15～0.2g/(kg·d)，每日總量不超過6g，加等量碳酸氫鈉分3～4次服用，首劑加倍。頻繁嘔吐或不能口服者，應(yīng)改為注射，SD為首選。成人4～6g/d，小兒0.1～0.15g/(kg